報(bào)告筆記（主講人：孟藏龍）

禽白血病是一類由禽白血病病毒引起的家禽多種腫瘤性疾病的總稱。它除了會(huì)導(dǎo)致腫瘤致死外，還會(huì)引起很多亞臨床癥狀，比如說產(chǎn)蛋性能、生產(chǎn)性能下降，在免疫禽病疫苗時(shí)出現(xiàn)免疫抑制的情況。

根據(jù)禽白血病經(jīng)典亞群分型方法共可以分為11個(gè)亞群，在自然狀態(tài)下可感染雞主要是ALV-A、B、C、D、E、J、K七個(gè)亞群，其中ALV-E屬于雞內(nèi)源性的禽白血病毒。禽白血病毒是非常重要的垂直傳播性疾病，它的傳播放大效應(yīng)是非常驚人的，一只感染的祖代雞在不檢測淘汰的情況下，會(huì)生產(chǎn)24萬只感染禽白血病的商品雞。正是由于它會(huì)對(duì)養(yǎng)雞業(yè)造成重大危害，所以禽白血病的凈化已經(jīng)達(dá)成行業(yè)共識(shí)。

禽白血病的凈化難點(diǎn)

實(shí)現(xiàn)全國性的禽白血病凈化是非常困難的。原因也很多，國內(nèi)家禽養(yǎng)殖模式復(fù)雜，有散戶，規(guī)模化養(yǎng)殖場，而且雞的品種較多，共同進(jìn)行監(jiān)測凈化，難度可想而知。并且國內(nèi)白羽肉雞種源并沒有完全實(shí)現(xiàn)自給自足，依然有進(jìn)口的需求，而進(jìn)口的種源也未必是完全干凈。從保護(hù)易感動(dòng)物角度來看，藥物治療和疫苗免疫并不可行，我們只能通過以檢測淘汰的方式來實(shí)現(xiàn)禽白區(qū)域或者場內(nèi)凈化。但是檢測凈化同樣面臨很多的問題。其中最為關(guān)注的有3點(diǎn)，一個(gè)是內(nèi)源性禽白血病毒的干擾問題嚴(yán)重。第二個(gè)就是診斷試劑的質(zhì)量參差不齊，主要體現(xiàn)在試劑的敏感度低和穩(wěn)定性差這兩個(gè)方面。第三個(gè)就是針對(duì)k亞群檢出率不高的問題特別突出，K亞群的復(fù)制能力相較于其他亞群來說較慢，國內(nèi)外很多文獻(xiàn)對(duì)這一點(diǎn)也有大量的研究。據(jù)推測，極大可能是因?yàn)樗腖TR區(qū)域源自ALV-E。這個(gè)LTR區(qū)域可能是某些商業(yè)ELISA試劑盒對(duì)ALV-K亞群檢出率低的主要原因。還有就是這么多亞群的禽白病毒，變異重組的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，這也會(huì)加大了禽白血病凈化的難度。

?在做群特異性鑒定中常用到的是病毒分離方法，這個(gè)也是國際公認(rèn)的特異性最強(qiáng)的一種檢測方法，但是它對(duì)人員操作要求非常高，不同的人在同一時(shí)間地點(diǎn)做，都會(huì)有很大的區(qū)別，而且檢測時(shí)間長，成本高，所以我們只在ELISA抗原初篩為陽性之后再做分離培養(yǎng)。

?ELISA方法是禽白凈化常用的核心檢測方法，優(yōu)點(diǎn)比較多，如操作簡單、可以大批量檢測、敏感度高，特異性強(qiáng)，樣本適應(yīng)性較廣，但缺點(diǎn)是不能區(qū)分內(nèi)外源。

?膠體金的方法雖然操作簡單，但是它的敏感性不高，跟ELISA方法相差較大，容易出現(xiàn)漏檢的情況。

?PCR方法在其他動(dòng)物疫病檢測中已經(jīng)大范圍使用，具有顯著的優(yōu)點(diǎn)。但是在禽白檢測過程中，并沒有大面積推廣使用。究其原因，主要是因?yàn)椴《咀儺?，引物不能完全覆蓋目標(biāo)基因；還有就是宿主體內(nèi)存在大量的內(nèi)源ev位點(diǎn)，容易出現(xiàn)假陽性的情況。

?還有一種亞群特異性檢測方法是IFA技術(shù)，它是利用ALV的表面抗原和特異性的抗體結(jié)合的一種方法。

通過比較上述幾種禽白血病的檢測方法的優(yōu)劣勢我們就可以了解了為什么當(dāng)前的檢測技術(shù)依然是以p27抗原ELISA技術(shù)和病毒分離培養(yǎng)為主要的檢測手段了。

試劑盒性能現(xiàn)狀

當(dāng)前p27抗原ELISA試劑盒的產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊，對(duì)于試劑盒的敏感性和穩(wěn)定性我們尤其關(guān)注。我們對(duì)這兩個(gè)方面也做了一些研究比對(duì)工作，并得出了一系列結(jié)論。

實(shí)驗(yàn)1結(jié)論：明日達(dá)兩款試劑盒對(duì)p27蛋白的最低檢測限可以達(dá)到0.61ng/ml，一家進(jìn)口、兩家國產(chǎn)的試劑盒可以達(dá)到1.22ng/ml，還有一款國產(chǎn)產(chǎn)品為4.88ng/ml。整體來看，大部分國產(chǎn)的試劑盒對(duì)p27抗原的檢測分析靈敏度表現(xiàn)良好。

實(shí)驗(yàn)2、3結(jié)論：明日達(dá)的試劑盒在對(duì)ALV-A/B/J/K四種亞型的細(xì)胞感染檢測中都表現(xiàn)出較好的分析敏感性，相較于其他廠家來說，在低劑量的情況下檢出時(shí)間早1-2天，而這個(gè)特點(diǎn)有助于禽白血病的早期診斷。

p27蛋白和ALV-A/B/J/K早期感染檢測分析敏感性高的試劑盒產(chǎn)品，不代表在診斷敏感性上也具有優(yōu)勢，應(yīng)該綜合評(píng)判試劑盒的性能。明日達(dá)試劑盒早期分析靈敏度和診斷靈敏度這兩個(gè)方面表現(xiàn)都非常優(yōu)秀。

實(shí)驗(yàn)4結(jié)論：檢測了三家進(jìn)口和兩家國產(chǎn)的試劑盒發(fā)現(xiàn)，進(jìn)口試劑盒的重復(fù)性不一定比國產(chǎn)的好，有兩家進(jìn)口的試劑盒的cv%值在10%-15%，只有一家進(jìn)口產(chǎn)品可以穩(wěn)定在5%以內(nèi)，而明日達(dá)的試劑盒在這方面可以做到<3%。

（實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為明日達(dá)自測數(shù)據(jù)，僅供參考。歡迎大家試用比對(duì)）